尼羅羅非魚(yú)Galectin-3基因的原核表達(dá)與條件優(yōu)化
關(guān)鍵詞：尼羅羅非魚(yú) 原核表達(dá) 條件優(yōu)化
摘要：【目的】對(duì)Galectin-3蛋白進(jìn)行純化,優(yōu)化誘導(dǎo)相關(guān)表達(dá)條件,為大量獲取羅非魚(yú)Galectin-3蛋白提供方案?！痉椒ā扛鶕?jù)NCBI上已公布的羅非魚(yú)(Oreochromis mossambicus)Galectin-3基因序列,設(shè)計(jì)多對(duì)帶EcoRI和Xhol酶切位點(diǎn)的引物,篩選出良性擴(kuò)增引物,對(duì)羅非魚(yú)cDNA經(jīng)進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增、限制性快切酶雙酶切、T4連接酶連接等步驟,構(gòu)建羅非魚(yú)Galectin-3基因的原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-Galectin-3,將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌BL21中,進(jìn)行Galectin-3重組蛋白的表達(dá)。并比較不同的誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)時(shí)間、IPTG濃度條件下的表達(dá)效果,對(duì)Galectin-3蛋白表達(dá)最優(yōu)條件進(jìn)行篩選。【結(jié)果】構(gòu)建了羅非魚(yú)Galectin-3原核表達(dá)質(zhì)粒,進(jìn)行Galectin-3重組蛋白后發(fā)現(xiàn)37℃下,0.4mmol/L濃度的IPTG誘導(dǎo)5h即可誘導(dǎo)Galectin-3重組蛋白高效表達(dá)。免疫印跡結(jié)果顯示,經(jīng)蛋白純化柱純化后的pGEX-4T-Galectin-3重組蛋白可與GST-Tag單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng),進(jìn)而表明表達(dá)的重組蛋白是羅非魚(yú)的Galectin-3蛋白?！窘Y(jié)論】本研究成功構(gòu)建了羅非魚(yú)Galectin-3基因的原核表達(dá)載體,并確定了Galectin-3融合蛋白最適的表達(dá)條件:37℃下,0.4mmol/L濃度的IPTG誘導(dǎo)5h。
廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)雜志要求:
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