低氧激活HIF-1α抑制人牙周膜成纖維細(xì)胞的成骨分化
關(guān)鍵詞：牙周炎 人牙周膜成纖維細(xì)胞 低氧 成骨分化
摘要：目的探討低氧環(huán)境對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞（periodontalligamentcells，PDLCs）成骨分化的影響，以及低氧誘導(dǎo)因子?1α（hypoxiainduciblefactor?1α，HIF?1α）在該過(guò)程中的作用。方法組織塊法原代分離牙周膜標(biāo)本中PDLCs，采用激光共聚焦檢測(cè)波形蛋白與細(xì)胞角蛋白表達(dá)。PDLCs分別在常氧（20%體積分?jǐn)?shù)O2）培養(yǎng)以及低氧（1%體積分?jǐn)?shù)O2）培養(yǎng)12～72h，檢測(cè)常氧組與低氧組PDLCs堿性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）活性，比較成骨標(biāo)志物ALP、I型膠原（Collogen?1，COL1）、成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子（runtrelatedtranscriptionfactor2,RUNX2）的mRNA表達(dá)量變化，Western免疫印跡檢測(cè)HIF?1α表達(dá)水平。進(jìn)一步轉(zhuǎn)染小干擾RNA（HIF?1α?siRNA1，2），檢測(cè)低氧環(huán)境中PDLCs的HIF?1α水平、ALP活性與成骨標(biāo)志物mRNA表達(dá)變化。采用SPSS13.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果組織塊法成功獲取PDLCs，PDLCs中波形蛋白陽(yáng)性表達(dá)、細(xì)胞角蛋白陰性表達(dá)。低氧環(huán)境中培養(yǎng)48h后PDLCs中ALP活性下降，ALP、COL1、RUNX2的mRNA表達(dá)量顯著降低，但HIF?1α蛋白表達(dá)升高。HIF?1α?siRNA成功敲低PDLCs中HIF?1α表達(dá)，敲低HIF?1α的PDLCs在低氧環(huán)境中的ALP活性升高，ALP、COL1、RUNX2的mRNA表達(dá)量增加。結(jié)論長(zhǎng)時(shí)間低氧處理能抑制PDLCs成骨分化，敲低HIF?1α表達(dá)可逆轉(zhuǎn)低氧對(duì)PDLCs成骨分化的抑制作用。
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