可誘導(dǎo)性表達(dá)呼吸道合胞病毒蛋白細(xì)胞系的快速構(gòu)建方法研究
韓連連; 鐘輝; 郭麗 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院&中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所; 北京100730
關(guān)鍵詞：呼吸道合胞病毒 piggybac轉(zhuǎn)座子 誘導(dǎo)性表達(dá) 細(xì)胞系構(gòu)建
摘要：目的研發(fā)用以快速構(gòu)建多種可誘導(dǎo)性表達(dá)呼吸道合胞病毒（RSV）蛋白的細(xì)胞系創(chuàng)新性的技術(shù)路線。方法將不同的RSV病毒蛋白基因分別連接到含有PiggyBac轉(zhuǎn)座子位點(diǎn)的Cumate誘導(dǎo)表達(dá)載體上，與PiggyBac轉(zhuǎn)座酶質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，利用嘌呤霉素進(jìn)行篩選，并用Cumate誘導(dǎo)病毒蛋白表達(dá)。結(jié)果流式細(xì)胞儀及Westernblot檢測(cè)結(jié)果均表明，加入誘導(dǎo)劑Cumate后，篩選的細(xì)胞系中開始表達(dá)相應(yīng)的病毒蛋白，提示細(xì)胞系構(gòu)建成功。結(jié)論利用PiggyBac轉(zhuǎn)座子可以高效率的構(gòu)建誘導(dǎo)性表達(dá)RSV病毒蛋白的細(xì)胞系。
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