分離小麥麥谷蛋白亞基的幾個(gè)關(guān)鍵因素研究
關(guān)鍵詞：小麥 麥谷蛋白亞基 優(yōu)化 分離方法
摘要：小麥高分子量、低分子量麥谷蛋白亞基組成是影響小麥加工品質(zhì)的重要因素,為了經(jīng)濟(jì)快速鑒定小麥高低分子量麥谷蛋白亞基組成,需要不斷對(duì)提取和分離這些蛋白的方法進(jìn)行優(yōu)化。在Singh等提出的提取分離小麥高低分子量麥谷蛋白亞基方法的基礎(chǔ)上,對(duì)其中涉及的單體蛋白去除、麥谷蛋白還原和烷化過(guò)程中使用的異丙醇濃度、烷化劑濃度以及烷化過(guò)程能否簡(jiǎn)化幾個(gè)關(guān)鍵因素進(jìn)行了深入研究。結(jié)果表明:在麥谷蛋白還原時(shí),在10%~50%的異丙醇濃度范圍內(nèi),不同濃度的異丙醇對(duì)高分子量麥谷蛋白亞基的提取效果沒(méi)有差別,而低分子量麥谷蛋白亞基在用低濃度異丙醇提取時(shí)效果較差,隨異丙醇濃度提高,提取效果逐漸提高,異丙醇濃度提高到30%時(shí),提取效果達(dá)到最高,異丙醇濃度繼續(xù)提高到50%,提取效果不再提高;使用30%和50%的異丙醇,去除單體蛋白的效果相同;把烷化劑直接加到樣品緩沖液中進(jìn)行烷化,不同濃度(0.6%~1.4%)的烷化劑處理麥谷蛋白亞基的烷化效果相同,但烷化劑濃度為1.4%時(shí)電泳背景較重。優(yōu)化后的方法為:在單體蛋白去除和麥谷蛋白還原時(shí)把異丙醇濃度由原來(lái)的50%降為30%,去掉單獨(dú)的烷化步驟,把0.6%的烷化劑直接加到樣品緩沖液中進(jìn)行烷化。優(yōu)化后的方法不但減少了試劑用量,簡(jiǎn)化了提取步驟,還提高了電泳條帶強(qiáng)度。
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