外胚葉發(fā)育不全基因及其受體在斑馬魚牙齒早期發(fā)育中的表達
關鍵詞：外胚葉發(fā)育不全 外胚葉發(fā)育不全受體 牙齒發(fā)育 斑馬魚 原位雜交
摘要：目的探討外胚葉發(fā)育不全(EDA)基因及其受體(EDAR)基因在斑馬魚早期咽齒發(fā)育過程中的表達模式,為進一步研究其在牙齒發(fā)育過程中的功能奠定基礎。方法提取受精后48 h(48 hpf)的斑馬魚胚胎總RNA,之后逆轉錄合成cDNA,以該cDNA為模板,特異性擴增斑馬魚咽齒特異性標記基因dlx2b、Eda信號通路相關基因eda及edar基因片段,用TA克隆試劑盒將這3個基因片段分別連接到pGEMT載體上,將對應質粒用聚合酶鏈反應(PCR)線性化,以PCR線性化做模板,選擇相應的RNA聚合酶體外轉錄,合成dlx2b、eda及edar基因的反義mRNA探針。收集36、48、56、60、72、84 hpf的斑馬魚胚胎,運用全胚原位雜交技術檢測eda及edar基因在斑馬魚咽齒發(fā)育部位的表達分布。比較原位雜交結果eda及edar表達區(qū)域與斑馬魚咽齒特異性標記基因dlx2b所指示咽齒部位的關系。結果獲得了dlx2b、eda及edar基因的反義m RNA探針。原位雜交結果顯示,48~72 hpf時eda及edar在鰓弓牙齒相應部位可見強棕褐色陽性信號,與dlx2b所指示咽齒部位吻合。結論Eda信號通路配體與受體在斑馬魚咽齒早期發(fā)育過程中即牙齒發(fā)生至形態(tài)發(fā)生階段于咽齒部位特異性強表達,這一結果顯示該信號通路可能參與斑馬魚咽齒早期發(fā)育的調控。
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