水稻高鹽脅迫下的酵母雙雜交文庫構(gòu)建及OsRPK1胞內(nèi)互作蛋白質(zhì)的篩選
關(guān)鍵詞：水稻 osrpk1 高鹽脅迫 酵母雙雜交cdna文庫
摘要：為了挖掘水稻OsRPK1胞內(nèi)互作蛋白質(zhì),闡明OsRPK1參與高鹽脅迫的分子機(jī)制,本研究利用SMART技術(shù),構(gòu)建水稻高鹽脅迫下根尖的酵母雙雜交文庫。PCR擴(kuò)增獲得OsRPK1基因編碼胞內(nèi)區(qū)域的堿基序列,構(gòu)建誘餌表達(dá)載體(pGBKT7-OsRPK1-CD),檢測誘餌表達(dá)載體在酵母中的毒性和自激活活性,篩選OsRPK1胞內(nèi)互作蛋白,進(jìn)一步分析高鹽脅迫下候選基因的表達(dá)模式。結(jié)果表明,構(gòu)建的cDNA文庫庫容量為1.11×10~7 CFU,文庫重組率為96%,文庫插入片段多態(tài)性較好。成功構(gòu)建了誘餌表達(dá)載體(pGBKT7-OsRPK1-CD),經(jīng)檢測誘餌表達(dá)載體無毒性,無自激活活性。誘餌表達(dá)載體與cDNA文庫進(jìn)行雙雜交篩選,經(jīng)測序和比對分析獲得了11個重要的候選基因,檢測候選基因在高鹽處理下的表達(dá)情況,其中8個候選基因受高鹽誘導(dǎo)表達(dá),2個候選基因受高鹽脅迫抑制表達(dá),1個候選基因受高鹽脅迫瞬時誘導(dǎo)表達(dá)后表達(dá)量又受到顯著抑制。
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