家蠶幼蟲-蛹變態(tài)期前胸腺和脂肪體細(xì)胞解離和程序性細(xì)胞死亡的比較分析
關(guān)鍵詞：家蠶 前胸腺 脂肪體 細(xì)胞解離 自噬
摘要：【目的】檢測家蠶Bombyx mori變態(tài)期前胸腺細(xì)胞的解離、自噬與凋亡,并與脂肪體的進行對比,從而解析昆蟲幼蟲-蛹變態(tài)期過程中不同組織重塑的異同。【方法】以家蠶5齡期、游走期、預(yù)蛹期和蛹期前胸腺和脂肪體組織為材料,在光學(xué)顯微鏡下觀察前胸腺和脂肪體細(xì)胞解離情況;分別利用Lyso-Tracker和TUNEL染色,在熒光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞自噬和細(xì)胞凋亡的發(fā)生情況;利用qRT-PCR檢測家蠶前胸腺中自噬發(fā)生標(biāo)志基因Atg8的表達水平;利用透射電鏡觀察前胸腺和脂肪體細(xì)胞自噬小體和前胸腺線粒體;利用Caspase3酶活性檢測試劑盒測定Caspase3酶活性;利用qRT-PCR檢測前胸腺中蛻皮酮(ecdysone)合成相關(guān)基因Spo,Phm,Dib和Sad的表達水平;利用酶免疫試驗(enzyme-immunoassay,EIA)測定前胸腺中蛻皮酮的含量,進而檢測合成蛻皮酮的活力。【結(jié)果】在家蠶幼蟲到蛹的變態(tài)發(fā)育過程中,在化蛹第1天家蠶前胸腺和脂肪體細(xì)胞中同時開始出現(xiàn)細(xì)胞解離;脂肪體細(xì)胞自噬和凋亡分別在游走期和預(yù)蛹第1天開始出現(xiàn)并逐漸增強;而前胸腺一直到化蛹第2天都沒有發(fā)生明顯的細(xì)胞自噬和凋亡;此外,前胸腺中線粒體的形態(tài)變化和蛻皮酮合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平均與對應(yīng)時期前胸腺合成蛻皮酮的活力一致?！窘Y(jié)論】在變態(tài)發(fā)育時家蠶不同組織消亡發(fā)生的時間不同,雖然前胸腺和脂肪體在化蛹第1天同時出現(xiàn)細(xì)胞解離,但是前胸腺直到化蛹第2天都不發(fā)生細(xì)胞自噬和凋亡,可能與其持續(xù)合成蛻皮酮的功能有關(guān)。本研究為昆蟲幼蟲-蛹變態(tài)發(fā)育時期組織消亡的深入研究提供了理論依據(jù)與工作基礎(chǔ)。
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