雷帕霉素對小鼠腭突細胞生物學(xué)特性的影響
關(guān)鍵詞：雷帕霉素 腭突細胞 自噬 小鼠
摘要：目的:研究雷帕霉素對小鼠腭突細胞(MEPCs)生物學(xué)特性的影響。方法:取胎齡13.5天的小鼠,分離培養(yǎng)MEPCs,加入不同濃度(0、5、10、50、100nmol/L)的雷帕霉素,觀察MEPCs活性、凋亡、遷移、成骨情況,選擇最佳作用濃度。Western blot法觀察在此濃度下不同的作用時間(0、3、6、12、24、48h)自噬標志物LC3Ⅱ和p62/SQSTM1表達水平的變化。結(jié)果:6h內(nèi),雷帕霉素促進MEPCs增殖,10nmol/L雷帕霉素作用效果最明顯;而6h后,雷帕霉素抑制MEPCs增殖,其作用呈時間依賴性,作用時間越長,抑制增殖作用越強。6h內(nèi),雷帕霉素抑制MEPCs凋亡,其中10nmol/L抑制效果最明顯;而6h后,雷帕霉素促進細胞凋亡。細胞劃痕結(jié)果表示,雷帕霉素促進MEPCs遷移,作用時間越長、濃度越高,促進遷移作用越強。雷帕霉素處理組抑制MEPCs成骨分化,堿性磷酸酶、茜素紅染色及鈣離子濃度結(jié)果顯示,隨著成骨誘導(dǎo)時間的延長,抑制作用增強,RT-PCR結(jié)果顯示成骨相關(guān)基因的表達低于對照組。雷帕霉素作用下,隨著作用時間的延長,LC3Ⅱ的表達明顯增加,p62/SQSTM1的表達與對照組相比明顯降低,呈時間依賴性,雷帕霉素促進了自噬。結(jié)論:雷帕霉素可能是通過促進自噬影響腭突細胞的生物學(xué)特性。
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