慢病毒介導的shRNA靶向干擾NSD2三陰乳腺癌穩(wěn)定細胞株的建立
關鍵詞：nsd2 三陰乳腺癌 rna干擾 慢病毒
摘要：目的:構建針對核受體結合SET結構域蛋白2(nuclear receptor binding SET domain protein 2,NSD2)的短發(fā)夾干擾RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒干擾載體,建立穩(wěn)定干擾NSD2基因的MDA-MB-231三陰乳腺癌細胞株。方法:構建2條針對人源NSD2基因的shRNA(shNSD2-1#和shNSD2-2#),連接到慢病毒載體(pGLV10/U6/RFP/Puro)并進行測序鑒定。將NSD2 shRNA慢病毒載體與包裝質(zhì)粒共轉染到293T細胞,慢病毒包裝后進行滴度檢測。將包裝好的慢病毒轉染至三陰乳腺癌MDA-MB-231細胞中,嘌呤霉素篩選建立穩(wěn)定轉染NSD2 shRNA的細胞株。采用real-time PCR檢測NSD2 mRNA的表達變化,蛋白質(zhì)印跡法檢測NSD2及其特異性催化的組蛋白甲基化標志物H3K36me2蛋白水平的表達變化。結果:成功構建兩個NSD2 shRNA慢病毒干擾載體;與陰性對照組相比,shNSD2-1#組和shNSD2-2#組MDA-MB-231細胞中NSD2 mRNA和蛋白水平均顯著下調(diào),NSD2催化的H3K36me2蛋白表達也隨之下調(diào)。結論:本研究成功建立了shRNA慢病毒載體介導的穩(wěn)定敲低NSD2的MDA-MB-231細胞株,證實干擾NSD2基因表達能有效抑制其對組蛋白H3K36的甲基化作用,為進一步研究NSD2在乳腺癌中的作用機制奠定了基礎。
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