實時熒光PCR熔解曲線法在β地中海貧血基因診斷和產(chǎn)前診斷中的臨床應(yīng)用評價
關(guān)鍵詞：實時熒光pcr 熔解曲線分析 基因診斷 產(chǎn)前診斷
摘要：目的對熒光PCR熔解曲線法用于β地中海貧血（β地貧）基因診斷和產(chǎn)前診斷進(jìn)行臨床評價。方法收集2011年1至8月柳州市婦幼保健院優(yōu)生遺傳實驗室外周血標(biāo)本451份，其中經(jīng)血液學(xué)表型分析為β地貧陽性表型標(biāo)本372份，β地貧陰性表型標(biāo)本79份。同時收集2011年6—9月夫婦雙方經(jīng)PCR—RDB針法確診為β地貧基因攜帶者，在我院行β地貧產(chǎn)前診斷的胎兒絨毛、羊水及臍帶血標(biāo)本共84份，其中孕10～β周胎兒絨毛標(biāo)本16份、孕16—24周羊水標(biāo)本64份、孕17周以上胎兒臍血標(biāo)本4份。按雙盲對照試驗，分別采用熒光PCR熔解曲線法（可檢測24種β珠蛋白基因突變）、PCR-反向點雜交（RDB探針法（可檢測17種β-珠蛋白基因突變）和DNA測序法同時對451份外周血標(biāo)本和84份胎兒絨毛、羊水、臍帶血產(chǎn)前診斷標(biāo)本進(jìn)行檢測。計算熒光PCR熔解曲線法和RDBPCR探針法、DNA基因測序法檢測結(jié)果的野生型符合率、突變型符合率和總符合率。結(jié)果利用熒光熔解曲線法在451份外周血標(biāo)本中共檢出β種突變類型、19種基因型，其中有447份標(biāo)本與PCR—RDB針法的基因型檢測結(jié)果相符，符合率為99．1％（447／451），902個等位基因位點檢出符合率為99．6％（898／902），有4份標(biāo)本與PCR—RDB針法的基因型檢測結(jié)果不相符，經(jīng)DNA測序法驗證，有3份標(biāo)本與熒光熔解曲線法的檢測結(jié)果完全一致，1份標(biāo)本的β珠蛋白基因突變不在熒光熔解曲線法檢測范圍而未被檢出。450份外周血標(biāo)本的熒光熔解曲線法檢測結(jié)果與DNA測序法相符，符合率為99．8％（450／451）。利用熒光熔解曲線法在84份產(chǎn)前診斷胎兒標(biāo)本中共檢出8種突變類型、18種基因型，168個等位基因位點的檢測結(jié)果與PCR—RDB針法和DNA基因測序法檢測結(jié)果符合率為100％。結(jié)論熒光PCR熔解曲線法可同時檢測多份待測標(biāo)本，并可準(zhǔn)確檢出多種基因突變類型，可用?
柳州醫(yī)學(xué)雜志要求:
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