不結(jié)球白菜BcSERK1基因的克隆及表達(dá)分析
關(guān)鍵詞：不結(jié)球白菜 bcserk1 克隆 序列分析 亞細(xì)胞定位
摘要：[目的]本文旨在研究不結(jié)球白菜BcSERK1基因及其在胚胎發(fā)生中的作用。[方法]采用同源克隆的方法從不結(jié)球白菜‘二樁白’中克隆到BcSERK1基因全長(zhǎng)序列,利用生物信息學(xué)分析其結(jié)構(gòu)特征,并與其他物種進(jìn)行氨基酸序列比對(duì)和進(jìn)化分析,同時(shí)利用基因槍介導(dǎo)的方法進(jìn)行亞細(xì)胞定位;利用小孢子培養(yǎng)技術(shù)研究不結(jié)球白菜‘二樁白’和‘四九菜心’小孢子培養(yǎng)出胚情況;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)分析BcSERK1基因在2個(gè)品種不同組織和在小孢子胚胎發(fā)生早期的表達(dá)特征。[結(jié)果]BcSERK1含有1個(gè)1 878 bp開放閱讀框,編碼625個(gè)氨基酸。與其他物種的氨基酸序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果顯示:BcSERK1在進(jìn)化過程中保守程度較高,與甘藍(lán)型油菜親緣關(guān)系最近。亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示:BcSERK1蛋白定位于細(xì)胞膜上。游離小孢子培養(yǎng)結(jié)果顯示:‘二樁白’出胚率較高,每蕾6.67個(gè)胚,而‘四九菜心’不出胚。RT-qPCR結(jié)果表明:BcSERK1在2個(gè)品種不同組織中均有表達(dá),除根外‘四九菜心’的組織中其表達(dá)量均低于‘二樁白’;在小孢子胚胎發(fā)生早期,BcSERK1基因在‘二樁白’不同培養(yǎng)時(shí)間的表達(dá)量均高于‘四九菜心’。[結(jié)論]BcSERK1蛋白在進(jìn)化過程中保守性較高,定位于細(xì)胞膜上;SERK1基因在2個(gè)不結(jié)球白菜品種中的差異表達(dá)表明該基因?qū)ε咛グl(fā)生具有重要作用。
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