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關(guān)鍵詞：龍膽酸1 產(chǎn)堿桿菌 基因表達(dá) 酶學(xué)性質(zhì) 

摘要：龍膽酸是芳香族化合物微生物降解的核心代謝產(chǎn)物,龍膽酸降解研究對(duì)于芳香族化合物的降解研究具有重要意義。龍膽酸1,2-雙加氧酶是催化龍膽酸降解的關(guān)鍵酶。本研究利用雙加氧酶催化保守結(jié)構(gòu)域在產(chǎn)堿桿菌P156的基因組上通過多序列比對(duì)找到一個(gè)龍膽酸雙加氧酶基因gdoP;利用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)該基因進(jìn)行異源表達(dá);并利用重組蛋白對(duì)酶學(xué)性質(zhì)和動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行測(cè)定。酶學(xué)性質(zhì)研究表明,GdoP催化反應(yīng)的最適pH為7.5,最適溫度為40℃。GdoP是一個(gè)Fe2+依賴型雙加氧酶,含有Fe2+離子結(jié)合結(jié)構(gòu)域。Fe2+離子能夠明顯促進(jìn)GdoP酶活,Cu2+、Cd2+離子對(duì)GdoP的酶活有明顯抑制。以龍膽酸為底物,GdoP的Km值和Vmax值分別為641μmol/L和23.9U/mg。GdoP具有較強(qiáng)的底物特異性,能夠催化龍膽酸開環(huán)生成3-馬來酰丙酮酸,不能催化5-氨基水楊酸、水楊酸和1-羥基-2-萘酸的轉(zhuǎn)化。本研究系統(tǒng)的研究了龍膽酸1,2-雙加氧酶GdoP的酶學(xué)性質(zhì),有助于更好的研究芳香族化合物的微生物降解過程。

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