木薯MeNRT2.5基因的克隆及表達(dá)分析
關(guān)鍵詞：木薯 高親和性硝酸根轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 基因克隆 表達(dá)分析
摘要：木薯具有高產(chǎn)、耐旱、耐貧瘠等特點(diǎn),為了解其耐貧瘠的作用機(jī)理,提高木薯在貧瘠土壤中對氮素的利用率,以30 d齡的“華南8號”組培苗為實(shí)驗(yàn)材料,采用同源克隆技術(shù)獲得1個(gè)高親和性硝酸根轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因NRT2。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,該基因開放閱讀框全長1 479 bp,編碼492個(gè)氨基酸,命名為MeNRT2.5。MeNRT2.5蛋白有10個(gè)跨膜區(qū)域,與橡膠樹、油桐樹、可可樹等物種的NRT2.5蛋白具有較高的同源性,其氨基酸序列相似性分別為94%,89.84%,87.40%。半質(zhì)量RT-PCR結(jié)果表明,MeNRT2.5基因在根、莖、葉、花等各個(gè)器官均有表達(dá),在成熟木薯植株的根中和組培苗的葉中表達(dá)量較高。實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分析表明,MeNRT2.5在低濃度NO 3^-(0.3 mmol·L^-1)處理后,其在根中的表達(dá)量在6 h時(shí)達(dá)到峰值;高濃度NO 3^-(3 mmol·L^-1)處理后,其表達(dá)量在根莖葉中均沒有明顯變化,即該基因的表達(dá)被高濃度NO 3^-所抑制。該研究結(jié)果為進(jìn)一步分析MeNRT2.5在木薯中的功能驗(yàn)證奠定理論基礎(chǔ)。
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