一種新型抗菌肽Hydramacin-1在畢赤酵母中的重組表達(dá)、純化及其抗菌活性
孟德梅; 石林玥; 李文娟; 孫雪晴; 郭雅君; 賈雪霞; 樊振川 省部共建食品營養(yǎng)與安全國家重點實驗室; 食品營養(yǎng)與安全教育部重點實驗室; 天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院; 大健康生物技術(shù)國際科技合作基地; 天津市大健康生物技術(shù)國際聯(lián)合研究中心; 天津300457
關(guān)鍵詞：抗菌肽 畢赤酵母 抗菌活性
摘要：Hydramacin-1是來源于大乳頭水螅(Hydra)的上皮防御組織的具有廣譜抗菌特性的新型抗菌肽.本研究構(gòu)建了外泌型重組酵母表達(dá)載體pPICZαA-Hydramacin-1,再將線性化的重組表達(dá)載體pPICZαA-Hydramacin-1電轉(zhuǎn)入畢赤酵母宿主菌(Pichia pastoris)GS115中,成功構(gòu)建了重組畢赤酵母表達(dá)菌株.在培養(yǎng)溫度為28℃、甲醇體積分?jǐn)?shù)為1.5%、誘導(dǎo)表達(dá)時長為120h時,蛋白表達(dá)量達(dá)到最高,重組抗菌肽Hydramacin-1的表達(dá)量可達(dá)83mg/L.經(jīng)陽離子交換柱純化,每升發(fā)酵液可得到約9mg純度為90%的重組抗菌肽Hydramacin-1.經(jīng)最小抑菌濃度的測定,制備的重組抗菌肽具有廣譜抗菌特性,相比于革蘭氏陽性菌,革蘭氏陰性菌對此抗菌肽更為敏感.本實驗將Hydramacin-1抗菌肽首次成功地在畢赤酵母中高效表達(dá),為以后該抗菌肽的理論研究和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ).
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