蔗糖富集環(huán)境中蔗糖磷酸化酶的酶學(xué)性質(zhì)研究與改造
關(guān)鍵詞：蔗糖磷酸化酶 酶學(xué)性質(zhì) 分子改造 轉(zhuǎn)糖苷
摘要：【背景】蔗糖富集土壤是蔗糖磷酸化酶的重要來源之一。此酶能以較廉價的蔗糖為底物進(jìn)行轉(zhuǎn)葡萄糖基反應(yīng),改善受體底物的理化性質(zhì),因而具有重要的應(yīng)用價值?！灸康摹垦芯空崽歉患寥乐姓崽橇姿峄傅拿笇W(xué)性質(zhì)和轉(zhuǎn)糖苷活性,為其更優(yōu)質(zhì)的改造提供材料和理論基礎(chǔ)。【方法】將宏基因組中獲得的蔗糖磷酸化酶基因克隆到表達(dá)載體上構(gòu)建重組大腸桿菌,誘導(dǎo)表達(dá)并進(jìn)行鎳親和層析純化蛋白。以蔗糖為底物測量重組酶的基本酶學(xué)性質(zhì),研究其對糖類底物的轉(zhuǎn)糖苷活性。通過底物通道分析,利用反向PCR技術(shù)對其第155位點進(jìn)行飽和突變,并測定突變體基本酶學(xué)性質(zhì)和轉(zhuǎn)糖苷活性?！窘Y(jié)果】純化的酶蛋白分子量大小約為56 kD,活性狀態(tài)時以三聚體形式存在。在以蔗糖為底物時,最適溫度和最適pH值分別為55°C和6.5;Km和Vmax值分別為23.1±2.4 mmol/L和407.9±8.5μmol/(mg·min),對第155位點進(jìn)行了定點飽和突變,獲得了部分酶學(xué)性質(zhì)或轉(zhuǎn)糖苷活性改善的突變體?！窘Y(jié)論】宏基因組中蔗糖磷酸化酶的研究豐富了酶學(xué)數(shù)據(jù),并通過分子改造獲得了部分性質(zhì)更優(yōu)的突變體,為轉(zhuǎn)糖苷活性關(guān)鍵氨基酸的研究和該酶的工業(yè)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
微生物學(xué)通報雜志要求:
{1}來稿研究內(nèi)容如屬各級基金資助項目，須在首頁腳注標(biāo)明其名稱，并注明編號。
{2}來稿應(yīng)嚴(yán)謹(jǐn)遵守學(xué)術(shù)規(guī)范，內(nèi)容表述清晰，語言流暢通達(dá)，邏輯嚴(yán)密。
{3}內(nèi)文的圖、表，請按規(guī)范要求繪制，并標(biāo)明圖序、表序、圖題、表題。
{4}注釋：是作者對文章某一內(nèi)容或詞語的必要解釋或說明，其內(nèi)容或詞語應(yīng)以加圈數(shù)字的上標(biāo)形式順序標(biāo)出，注釋性文字按順序置于參考文獻(xiàn)之前。例：機聯(lián)網(wǎng)絡(luò)①。
{5}正文文字請用宋體五號；獨立引文用仿宋五號（起四回二）。
注：因版權(quán)方要求，不能公開全文，如需全文，請咨詢雜志社
