Lewis肺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清液通過調(diào)控糖酵解途徑增強(qiáng)小鼠髓源性抑制細(xì)胞的免疫抑制功能
關(guān)鍵詞：腫瘤微環(huán)境 糖酵解
摘要：目的探討Lewis肺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清(TCCM)對髓源性抑制細(xì)胞(MDSC)代謝和功能的影響。方法免疫磁珠法分離Lewis肺癌移植瘤小鼠脾臟MDSC,用小鼠TCCM處理MDSC 48 h后,實時熒光定量PCR檢測MDSC中乳酸脫氫酶A(LDHA)及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)、缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)mRNA的水平,己糖激酶(HK)法檢測葡萄糖濃度,乳酸檢測試劑盒檢測糖酵解途徑終產(chǎn)物乳酸含量,羧基熒光素二乙酸鹽琥珀酰亞胺酯(CFSE)染色結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測MDSC對CD4^+T細(xì)胞增殖的抑制作用,精氨酸酶1(ARG1)檢測試劑盒檢測MDSC的ARG1活性,一氧化氮試劑盒檢測誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的分泌水平。結(jié)果與未處理組相比,TCCM處理過的MDSC糖酵解途徑關(guān)鍵酶LDHA的mRNA水平及糖酵解途徑相關(guān)蛋白GLUT1、HIF-1α的mRNA水平明顯上調(diào),MDSC分泌的免疫抑制性效應(yīng)分子ARG1的活性和iNOS的分泌量顯著增加,MDSC對CD4^+T細(xì)胞增殖的抑制作用明顯增強(qiáng)。結(jié)論TCCM能夠激活MDSC的糖酵解途徑,上調(diào)其對CD4^+T細(xì)胞增殖的抑制作用及免疫抑制效應(yīng)分子的釋放。
細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志要求:
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