Spexin轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建及表型初步分析
關(guān)鍵詞：spexin piggybac 轉(zhuǎn)基因小鼠 糖耐受
摘要：Spexin是一種具有多種生物學(xué)功能的神經(jīng)肽,在代謝疾病及神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮重要作用.為了深入研究spexin的生理功能和相關(guān)機(jī)制,構(gòu)建了spexin轉(zhuǎn)基因小鼠,通過(guò)檢測(cè)血液中spexin含量以及糖耐受實(shí)驗(yàn),對(duì)模型小鼠進(jìn)行了初步的表型分析.利用piggyBac(PB)轉(zhuǎn)座子技術(shù)培育spexin轉(zhuǎn)基因小鼠,采用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分別在基因?qū)用婧偷鞍讓用骝?yàn)證了模型動(dòng)物是否構(gòu)建成功.之后用飼喂高脂飼料的雄性小鼠進(jìn)行糖耐受實(shí)驗(yàn),對(duì)轉(zhuǎn)基因模型小鼠進(jìn)行表型分析.PCR結(jié)果顯示,以靶向spexin的兩對(duì)引物擴(kuò)增,轉(zhuǎn)基因型小鼠基因組DNA中能分別擴(kuò)增出300 bp和301 bp的片段,而野生型小鼠則不能.ELISA結(jié)果中,轉(zhuǎn)基因型小鼠血清中spexin含量較野生型小鼠顯著升高;同一表型中,雌雄小鼠間血清中spexin水平無(wú)明顯差異.飼喂高脂飼料85 d內(nèi),轉(zhuǎn)基因型小鼠和野生型小鼠體重變化未觀察到顯著差異;糖耐受結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因型小鼠每個(gè)時(shí)間點(diǎn)血糖濃度均低于野生型小鼠,且在15 min時(shí)具有顯著性差異.結(jié)果顯示成功構(gòu)建了過(guò)表達(dá)spexin基因的小鼠模型.spexin表達(dá)水平的升高在一定程度上提高了C57BL/6小鼠的糖耐受能力.該模型為進(jìn)一步研究spexin基因在動(dòng)物體內(nèi)的功能以及在代謝疾病發(fā)病機(jī)制中的作用奠定了基礎(chǔ).
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