關(guān)鍵詞:納米熒光蛋白 原核表達(dá) 純化
摘要:由熒光素酶(luciferase)催化的一大類發(fā)光反應(yīng)被統(tǒng)稱為生物發(fā)光(bioluminescence),該反應(yīng)具有背景低、靈敏度高、線性范圍廣等特點(diǎn),是高靈敏檢測(cè)的發(fā)展方向之一。課題組在近期的研究中全基因合成了一種納米熒光素酶(nanoluciferase),研究清楚了其理化性質(zhì)的基礎(chǔ)上,將其作為一種新型的生物發(fā)光檢測(cè)工具。將熒光素酶基因克隆至原核高表達(dá)載體上,通過(guò)自動(dòng)誘導(dǎo)系統(tǒng)進(jìn)行了表達(dá)。通過(guò)Ni—NTA親和層析純化和分子篩將重組納米熒光素酶進(jìn)行純化,其產(chǎn)量可穩(wěn)定達(dá)到每升菌25.3mg,純度超過(guò)98%;通過(guò)酶活實(shí)驗(yàn)鑒定了納米熒光素酶的活性,在1.0×10^-4~1.0×10^-ms/mE的范圍內(nèi),該酶均具有良好的線性反應(yīng),其線性檢測(cè)下限低至1.0×10^-4mg/mL(約5pmol)。納米熒光素酶具有靈敏度高、數(shù)據(jù)重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性高、易于保存等多重優(yōu)點(diǎn),可利用其作為基礎(chǔ)平臺(tái),開(kāi)發(fā)具有應(yīng)用前景的超靈敏新型生物發(fā)光探針。
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