雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌重組酶聚合酶擴(kuò)增檢測(cè)方法的建立
關(guān)鍵詞：產(chǎn)氣莢膜梭菌 重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù) 熒光定量檢測(cè) 雞壞死性腸炎
摘要：為建立雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)的快速診斷方法,本研究以產(chǎn)氣莢膜梭菌α-毒素的編碼基因plc為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)、合成引物和探針,并以real-time PCR的方法進(jìn)行驗(yàn)證,建立了雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌的重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)檢測(cè)方法。該方法可在38℃、25 min內(nèi)對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌的α-毒素編碼序列進(jìn)行快速特異性擴(kuò)增,最低檢測(cè)限量可達(dá)1×10^1copies/μL,靈敏度良好。以此方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室保存的臨床樣本,其檢測(cè)結(jié)果與real-time PCR的檢測(cè)結(jié)果一致。上述結(jié)果表明,本研究建立的real-time RPA方法在檢測(cè)雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌時(shí)具有操作簡(jiǎn)單、快速靈敏的特點(diǎn),適用于雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌的臨床檢測(cè)。
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