豬繁殖與呼吸綜合征病毒SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法的建立與應(yīng)用
關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征 sybr 實(shí)時熒光定量pcr
摘要：本研究根據(jù)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,設(shè)計(jì)出一對引物,建立了檢測該病毒的SYBR GreenⅠ染料熒光定量PCR方法。此法特異性高,與豬流行性腹瀉(PEDV)、豬瘟病毒(CSFV)、塞內(nèi)卡谷病毒(SVV)、腦心肌炎病毒(EMCV)、偽狂犬病病毒(PRV)和豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)均無交叉反應(yīng);采用不同滴度的PRRSV測定,當(dāng)Ct≤32且有明顯的指數(shù)擴(kuò)增曲線,判定為PRRSV陽性,Ct>32或者無Ct值則判定為PRRSV陰性。該方法檢測下限為1×10^0.5TCID50病毒,高于常規(guī)RT-PCR國家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T18090-2008),批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于1%。PRRSV人工感染仔豬15份肺臟組織和60份血清樣品檢測結(jié)果均為陽性,SPF仔豬8份肺臟組織和25份血清檢測結(jié)果均為陰性。采集245份臨床仔豬肺臟組織病料檢測,PRRSV陽性率為67.35%,明顯高于普通RT-PCR檢測陽性率(56.33%)。上述結(jié)果表明,本方法可用于PRRSV臨床病料檢測。
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