雞源SUMO標(biāo)簽蛋白的鑒定及在IBDV VP2原核表達(dá)中的促溶功能
關(guān)鍵詞：雞源sumo蛋白 ibdv vp2 標(biāo)簽蛋白 融合表達(dá)
摘要：VP2蛋白是傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的保護(hù)性抗原。原核表達(dá)中能否獲得具有天然構(gòu)象的可溶性VP2蛋白是研發(fā)IBD亞單位疫苗的關(guān)鍵問(wèn)題。為了解是否存在雞自體促溶標(biāo)簽蛋白以及外源促溶標(biāo)簽?zāi)芊裨谝欢ǔ潭壬洗龠M(jìn)蛋白的正確折疊,試驗(yàn)對(duì)不同物種來(lái)源的類(lèi)泛素蛋白修飾分子(small ubiquitin-like modifier,SUMO)進(jìn)行比對(duì)研究。結(jié)果顯示,獲取到的3種雞源SUMO蛋白與酵母源SUMO蛋白的氨基酸同源性均高于40%,其中SUMO-1與SUMO-3兩種蛋白可以在大腸桿菌中可溶性表達(dá);通過(guò)SUMO-1、SUMO-3與VP2蛋白的融合表達(dá),證明了雞源SUMO蛋白對(duì)VP2具有促溶效果,得到的重組菌株P(guān)-28A-s1-VP2和P-28A-Os3-VP2瓊脂擴(kuò)散效價(jià)均達(dá)到1∶16;經(jīng)過(guò)純化后,融合蛋白SUMO-1-VP2的瓊脂擴(kuò)散效價(jià)可達(dá)到1∶256;使用SUMO蛋白酶酶切融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot結(jié)果表明雞源SUMO蛋白可以被成功切割,說(shuō)明試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的雞源SUMO蛋白可以作為促溶標(biāo)簽,在亞單位疫苗關(guān)鍵抗原表達(dá)中具有廣闊的應(yīng)用前景。
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