魚源魯氏耶爾森菌mobBC基因無痕缺失株的構(gòu)建及其毒性研究
關(guān)鍵詞：魯氏耶爾森菌 mobbc基因 無痕缺失 體內(nèi)感染 毒性
摘要：為探究魯氏耶爾森菌(Yersinia ruckeri)的四型分泌系統(tǒng)(T4SS)中mobBC基因的作用,本研究構(gòu)建了強(qiáng)毒力Y.ruckeri SC09菌株mobBC基因的無痕缺失株并研究了其生理變化和毒性影響。將mobBC基因上、下游同源臂克隆入自殺載體pLP12并轉(zhuǎn)化供體菌β2163,得到pLP12-mobBC/β2163,進(jìn)一步通過接合轉(zhuǎn)移,將pLP12-mobBC導(dǎo)入受體菌株SC09中。利用抗性篩選和vmi480反向篩選獲得無痕缺失株Y.ruckeriΔmobBC,并進(jìn)行PCR測序鑒定。同時構(gòu)建回補(bǔ)株Y.ruckeriΔmobBC+p Mob BC。通過電子顯微鏡觀察缺失株形態(tài)變化,同時繪制野生型菌株、缺失株和回補(bǔ)株的生長曲線;將缺失株和野生型菌株感染模式小鼠,初步研究mobBC毒性;將野生型菌株、缺失株和回補(bǔ)株感染虹鱒魚,進(jìn)一步研究其對水生動物的體內(nèi)毒性;對虹鱒魚主要感染組織進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)并分析菌株在感染組織的分布差異;觀察感染缺失株和野生型菌株的虹鱒魚組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)差異,進(jìn)一步分析毒性影響。結(jié)果顯示,本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了無痕缺失株Y.ruckeriΔmobBC,并回補(bǔ)了mobBC基因。缺失株與野生株超微結(jié)構(gòu)對比變化不顯著,但缺失株的生長性能弱于野生株和回補(bǔ)株,且表現(xiàn)出較弱的體內(nèi)毒性和較輕的組織感染力。這提示mobBC基因可能是Y.ruckeri重要的毒力基因,該基因的缺失能夠有效降低Y.ruckeri的增殖力和對宿主的感染力。本文首次研究了水產(chǎn)病原菌Y.ruckeri SC09的mobBC基因的毒性作用,為該病原菌的毒力研究增加了新的基礎(chǔ)。
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