間介中胚層樣細(xì)胞在腎臟再生中的應(yīng)用
關(guān)鍵詞：脂肪干細(xì)胞 間介中胚層樣細(xì)胞 脫細(xì)胞支架 誘導(dǎo)分化
摘要：目的體外誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞分化為間介中胚層樣細(xì)胞,對腎臟脫細(xì)胞支架進(jìn)行再細(xì)胞化,經(jīng)共培養(yǎng)構(gòu)建有部分腎臟結(jié)構(gòu)的組織工程腎臟。方法手術(shù)獲取Wistar大鼠腹股溝脂肪墊,從中分離、培養(yǎng)原代脂肪干細(xì)胞后對其進(jìn)行干細(xì)胞特性鑒定。經(jīng)過在不同階段添加糖原合成酶激酶3抑制劑(CHIR99021)和成纖維生長因子9(FGF9),誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞分化為間介中胚層樣細(xì)胞,并于誘導(dǎo)7 d后進(jìn)行間介中胚層相關(guān)蛋白鑒定。將誘導(dǎo)成功的間介中胚層樣細(xì)胞結(jié)合制備好的腎臟脫細(xì)胞支架進(jìn)行共培養(yǎng),10 d后獲取再細(xì)胞化的組織工程腎臟,并對其進(jìn)行腎臟分化的鑒定。結(jié)果獲取的脂肪干細(xì)胞具有成骨成脂及成軟骨分化的能力,能表達(dá)脂肪干細(xì)胞表面標(biāo)志物。體外誘導(dǎo)7 d后得到的間介中胚層樣細(xì)胞經(jīng)過免疫熒光鑒定可以觀察到鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子和配對盒基因- 2的陽性表達(dá),Western blot驗(yàn)證可得到同樣的陽性結(jié)果。結(jié)合腎臟脫細(xì)胞支架后培養(yǎng)10 d,通過免疫熒光鑒定可以觀察到Wilms腫瘤基因1、 GATA連接蛋白- 3和E-鈣黏素的陽性表達(dá)。結(jié)論脂肪干細(xì)胞可被誘導(dǎo)分化為間介中胚層樣細(xì)胞,誘導(dǎo)后的間介中胚層樣細(xì)胞結(jié)合腎臟脫細(xì)胞支架可以觀察到腎系分化的現(xiàn)象。
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