基于表達(dá)熒光蛋白的海分枝桿菌感染斑馬魚模型的抗結(jié)核藥物評(píng)價(jià)方法的研究
關(guān)鍵詞：斑馬魚 抗結(jié)核藥 藥物評(píng)價(jià) 重組海分枝桿菌 熒光像素計(jì)數(shù)法
摘要：目的為了提高基于熒光檢測(cè)的海分枝桿菌-斑馬魚感染模型的靈敏度和準(zhǔn)確度,我們構(gòu)建了毒力較弱的可以表達(dá)紅色熒光蛋白的重組菌Mm927-pR2HYG,建立了斑馬魚感染模型,用于抗結(jié)核藥物的藥效評(píng)價(jià)和篩選。方法重組菌Mm927-pR2HYG經(jīng)受精卵卵黃囊注射感染斑馬魚幼魚,通過(guò)測(cè)定斑馬魚致死率確定其對(duì)斑馬魚的感染性,并在激光共聚焦顯微鏡下觀察其在斑馬魚體內(nèi)的分布。同時(shí)應(yīng)用熒光像素計(jì)數(shù)法對(duì)異煙肼和利福平的治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果成功構(gòu)建了表達(dá)熒光蛋白的重組海分枝桿菌Mm927-pR2HYG感染斑馬魚模型。異煙肼和利福平兩種抗結(jié)核藥物在該模型中均具有良好的治療作用;應(yīng)用熒光像素計(jì)數(shù)法和qPCR計(jì)數(shù)法進(jìn)行的藥效評(píng)價(jià)結(jié)果具有較好的一致性。結(jié)論重組海分枝桿菌Mm927-pR2HYG感染斑馬魚模型結(jié)合熒光像素計(jì)數(shù)法是一種快速、高效、直觀的藥物體內(nèi)評(píng)價(jià)系統(tǒng),可以用于抗結(jié)核藥物的高通量篩選。
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