草酸鈣結(jié)石晶體對(duì)人近曲腎小管上皮細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響
關(guān)鍵詞：草酸鈣結(jié)晶 腎結(jié)石 蛋白質(zhì)表達(dá)譜 腎上皮細(xì)胞 聚類(lèi)分析
摘要：目的探討腎結(jié)石草酸鈣晶體對(duì)人近曲腎小管上皮細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響,篩選差異表達(dá)蛋白質(zhì)并初步探討腎結(jié)石與腎損傷的關(guān)系。方法選取臨床經(jīng)結(jié)石成分分析為草酸鈣的腎結(jié)石標(biāo)本,充分研磨后配制草酸鈣晶體懸液,處理人近曲腎小管上皮細(xì)胞HK-2,提取總蛋白并通過(guò)SDS-PAGE對(duì)蛋白質(zhì)量進(jìn)行鑒定,通過(guò)BCA法測(cè)定蛋白濃度,然后通過(guò)TMT標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析法篩選實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組蛋白質(zhì)表達(dá)譜的差異,最后通過(guò)生物信息學(xué)的方法進(jìn)行聚類(lèi)分析、GO富集分析以及差異基因相關(guān)的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析。結(jié)果草酸鈣晶體對(duì)HK-2細(xì)胞顯示出明顯的細(xì)胞毒性,細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢且引起細(xì)胞形態(tài)以及培養(yǎng)基PH值發(fā)生顯著改變。TMT標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析結(jié)果顯示經(jīng)草酸鈣晶體處理后的HK-2細(xì)胞中差異表達(dá)的蛋白分子共1 141個(gè),其中上調(diào)表達(dá)的699個(gè),下調(diào)表達(dá)的442個(gè)。生物信息學(xué)分析結(jié)果提示這些差異蛋白在細(xì)胞外復(fù)合體、細(xì)胞器以及多種細(xì)胞學(xué)過(guò)程中發(fā)揮重要作用;差異蛋白共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞骨架維持(ACTB,CFL1)和細(xì)胞特殊功能如分泌和加帽中起作用的蛋白(MYH9,MYH14)關(guān)系最為密切。結(jié)論草酸鈣結(jié)晶對(duì)人腎上皮細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)有顯著影響,并且這些差異表達(dá)的蛋白質(zhì)分子可能與腎結(jié)石的形成以及腎損傷有關(guān)。
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