nephrin通過P13K—Akt途徑抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的足細胞凋亡
關(guān)鍵詞：足細胞 細胞凋亡 nephrin 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
摘要：目的研究nephrin在血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）誘導(dǎo)足細胞凋亡中的作用，以及可能的分子機制。方法體外培養(yǎng)永生化小鼠足細胞（MPC），以不同濃度AngⅡ處理MPC和10μmol／LAngⅡ刺激不同時間，用流式細胞儀檢測細胞凋亡率；實時定量PCR、免疫熒光和Western印跡法檢測nephrin的表達和分布；Western印跡法檢測Akt磷酸化水平。脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染pcDNA3．1-mNPHS1質(zhì)粒，G418篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系。用Akt抑制劑LY294002或與AngⅡ共孵育刺激MPC和pcDNA3．1-mNPHSl轉(zhuǎn)染細胞，檢測Akt磷酸化水平和細胞凋亡率。結(jié)果（1）AngⅡ以劑量和時間依賴方式誘導(dǎo)MPC凋亡。AngⅡ受體拮抗藥氯沙坦與AngⅡ共孵育18h，顯著降低AngⅡ單獨刺激的足細胞凋亡率（P〈0．05）。（2）10μmol／LAngⅡ刺激12h后，nephrinmRNA和蛋白較對照組顯著降低，24hnephrinmRNA約為正常對照的50％（P〈0．05）。正常足細胞nephrin主要分布于核膜周圍的胞質(zhì)和細胞膜，隨刺激時間延長，胞膜和胞質(zhì)neDhrin表達逐漸降低。（5）10μmol／LAngⅡ刺激15min后，Akt磷酸化顯著降低，約為正常對照細胞的50％（P〈0．01）。（4）AngⅡ與LY294002共孵育12h后，細胞凋亡率顯著高于AngⅡ和LY294002單獨刺激（均P〈0．05）。（5）pcDNA3．1-mNPHSl穩(wěn)定轉(zhuǎn)染顯著上調(diào)足細胞Akt磷酸化水平（P〈0．05），抑制AngⅡ誘導(dǎo)的細胞凋亡（P〈0．05）。結(jié)論AngⅡ通過AngⅡ受體誘導(dǎo)小鼠足細胞凋亡，抑制足細胞nephrin表達。nephrin通過P13K—Akt信號通路調(diào)節(jié)足細胞存活狀態(tài)。
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