利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選大豆結(jié)瘤因子受體NFR1α的互作蛋白
關(guān)鍵詞：大豆 共生固氮 結(jié)瘤因子受體蛋白 酵母雙雜交 豆血紅蛋白
摘要：大豆是重要的植物蛋白作物和糧豆間作作物,挖掘大豆的生物固氮潛力,對(duì)推動(dòng)生態(tài)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有深遠(yuǎn)意義。大豆結(jié)瘤因子受體蛋白GmNFR1?(Nod Factor Receptor)對(duì)結(jié)瘤至關(guān)重要,但其具體調(diào)控機(jī)制尚不明確。本研究以大豆mRNA為模板,利用RT-PCR方法擴(kuò)增到GmNFR1α蛋白的激酶結(jié)構(gòu)域(GmNFR1α-pk),構(gòu)建了pGBKT7-GmNFR1α-pk誘餌表達(dá)載體,通過酵母雙雜交技術(shù),篩選大豆根瘤AD-cDNA文庫(kù),從文庫(kù)中分離到與GmNFR1α-pk相互作用的71個(gè)陽(yáng)性克隆,經(jīng)測(cè)序和同源性分析篩選到12種與GmNFR1α-pk互作的蛋白,包括鈣離子結(jié)合手性蛋白、豆血紅蛋白、結(jié)瘤素Nod44等蛋白。以大豆豆血紅蛋白GmLbc2為例,回轉(zhuǎn)酵母以及煙草體內(nèi)BiFC驗(yàn)證其與誘餌蛋白的相互作用,對(duì)其進(jìn)行同源蛋白比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析,并利用百脈根毛根轉(zhuǎn)化技術(shù)鑒定GmLbc2在結(jié)瘤過程中的生物學(xué)功能。研究結(jié)果進(jìn)一步補(bǔ)充和完善了GmNFR1α介導(dǎo)的結(jié)瘤信號(hào)傳遞途徑,為大豆與根瘤菌共生互作機(jī)制提供了新的分子證據(jù)。
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